Trang chủ > Tin tức > Nội dung

Thiết kế của Phòng thí nghiệm PCR là gì

Aug 03, 2020

Cốt lõi của thiết kế phòng thí nghiệm PCR:


1, bố trí phòng thí nghiệm PCR

Phòng thí nghiệm thử nghiệm khuếch đại PCR được chia thành ba khu vực làm việc riêng biệt về nguyên tắc: khu vực bảo quản và chuẩn bị thuốc thử, khu vực chuẩn bị mẫu bệnh phẩm, khu vực phân tích sản phẩm khuếch đại và khuếch đại. Để tránh lây nhiễm chéo, việc đi vào mỗi khu vực làm việc phải tuân thủ nghiêm ngặt một hướng duy nhất, đó là chỉ đi từ khu vực bảo quản và pha chế thuốc thử → khu vực chuẩn bị mẫu → khu vực phân tích sản phẩm khuếch đại và khuếch đại. Việc chuyển thuốc thử và mẫu giữa từng khu vực thí nghiệm cần được thực hiện qua cửa sổ chuyển.



2. Thiết kế hệ thống điều hòa không khí và thông gió trong phòng thí nghiệm và kiểm soát áp suất

Phòng thí nghiệm PCR không có yêu cầu nghiêm ngặt về mức độ tinh sạch, nhưng để tránh khả năng nhiễm chéo giữa các khu vực thí nghiệm khác nhau, nên áp dụng hình thức tổ chức không khí thải đầy đủ và phân phối đầy đủ. Đồng thời phải kiểm soát chặt chẽ tỷ lệ cấp khí và thải khí để đảm bảo yêu cầu về áp suất của từng khu vực thí nghiệm.


微信图片_20200701162204

(1) Khu vực bảo quản và chuẩn bị thuốc thử

Các hoạt động chính trong khu vực thí nghiệm này là chuẩn bị thuốc thử lưu trữ, phân phối thuốc thử và chuẩn bị hỗn hợp phản ứng chính. Thuốc thử và vật liệu dùng để chuẩn bị mẫu phải được vận chuyển trực tiếp đến khu vực này và không qua khu vực khác. Nguyên liệu thô của thuốc thử phải được bảo quản trong khu vực này và được chuẩn bị thành các thuốc thử bảo quản bắt buộc trong khu vực này. Để kiểm soát áp suất luồng không khí, khu vực này nên duy trì một áp suất dương nhẹ bên ngoài.



(2) Khu vực chuẩn bị mẫu

Các hoạt động chính trong lĩnh vực này là bảo quản mẫu, chiết xuất axit nucleic (RNA, DNA), lưu trữ và thêm vào ống phản ứng khuếch đại và đo tổng hợp DNA. Gradient áp suất trong khu vực này được yêu cầu là áp suất dương so với khu vực lân cận để tránh ô nhiễm sol khí xâm nhập vào khu vực từ khu vực lân cận. Ngoài ra, vì ô nhiễm do sol khí có thể xảy ra trong quá trình nạp mẫu, nên tránh đi lại không cần thiết trong khu vực này.


(3) Khu vực phân tích sản phẩm khuếch đại và khuếch đại

Các hoạt động chính trong lĩnh vực này là khuếch đại DNA và xác định các đoạn khuếch đại. Ngoài ra, việc bổ sung khuôn mẫu DNA đã chuẩn bị (từ khu vực chuẩn bị mẫu) và chuẩn bị hỗn hợp phản ứng chính (từ khu vực bảo quản và chuẩn bị thuốc thử) vào hỗn hợp phản ứng cũng có thể được thực hiện trong khu vực này. Các yêu cầu về gradient áp suất trong khu vực này là: áp suất âm so với khu vực lân cận để tránh rò rỉ sol khí từ khu vực này. Để tránh ô nhiễm do sol khí, nên giảm thiểu việc đi bộ không cần thiết trong khu vực. Các thao tác riêng lẻ như thêm mẫu phải được thực hiện trong một băng ghế cực sạch.


3. Phòng ngừa và kiểm soát ô nhiễm


Vấn đề cốt lõi của thiết kế phòng thí nghiệm PCR là làm thế nào để tránh nhiễm bẩn. Trong thực tế công việc, các dạng ô nhiễm sau đây thường gặp: ô nhiễm các sản phẩm khuếch đại; sự ô nhiễm DNA bộ gen tự nhiên; sự nhiễm bẩn của thuốc thử và sự nhiễm bẩn giữa các mẫu vật. Bởi vì một khi ô nhiễm xảy ra, thí nghiệm phải được dừng lại cho đến khi tìm ra nguồn gây ô nhiễm, và kết quả của thí nghiệm phải bị hủy bỏ và thí nghiệm phải được lặp lại. Do đó, việc tìm nguồn ô nhiễm xung quanh phòng thí nghiệm sau khi xảy ra ô nhiễm tốn nhiều thời gian và công sức, lãng phí nhân lực và vật lực. Vì vậy, để tránh ô nhiễm, ưu tiên hàng đầu là phòng ngừa chứ không phải loại bỏ.


(1) Phân chia khu vực làm việc nghiêm ngặt

Việc bố trí từng khu vực thí nghiệm hợp lý; Mỗi khu vực thí nghiệm cần có dấu hiệu rõ ràng (như số nhà bắt mắt hoặc màu nền khác nhau, v.v.) để tránh nhầm lẫn thiết bị và thuốc thử trong các khu vực thí nghiệm khác nhau.


(2) Cài đặt hệ thống hợp lý

Cài đặt hệ thống điều hòa không khí và thông gió hợp lý, cố gắng sử dụng hệ thống điều hòa không khí phân phối và xả đầy đủ; kiểm soát áp suất dòng khí nghiêm ngặt để đảm bảo các yêu cầu áp suất khác nhau trong các khu vực thí nghiệm khác nhau.


(3) Hoạt động tiêu chuẩn

Các kỹ thuật viên của phòng thử nghiệm khuếch đại phải được đào tạo tại chỗ và chỉ sau khi đủ điều kiện mới được tham gia thử nghiệm khuếch đại gen lâm sàng; trong quá trình vận hành thử nghiệm, người vận hành phải đeo găng tay và thay găng tay thường xuyên. Ngoài ra, việc sử dụng mũ dùng một lần trong hoạt động cũng là một biện pháp hữu hiệu để ngăn ngừa ô nhiễm; công tác vệ sinh kịp thời và đúng quy trình. Sau khi công việc thí nghiệm kết thúc, khu vực này phải được làm sạch ngay lập tức. Ngoài dung dịch khử trùng thông thường để lau và khử trùng bề mặt hoặc khử trùng bằng chiếu tia cực tím, một số thiết bị thí nghiệm cũng nên được hấp tiệt trùng.


(4) Quản lý chặt chẽ

Kiểm soát chặt chẽ nhân viên ra vào phòng thí nghiệm. Nhân viên không liên quan gì đến thí nghiệm không được phép ra vào phòng thí nghiệm tùy ý. Nếu có thể, thiết lập các lối đi và cửa độc lập để ra vào toàn bộ khu vực thí nghiệm; giảm thiểu việc đi lại không cần thiết trong khu vực thí nghiệm để giảm khả năng lây nhiễm chéo; các sản phẩm khuếch đại Khu vực phân tích là nguồn lây nhiễm chính của các sản phẩm khuếch đại. Chất lỏng thải không được đổ trong phòng thí nghiệm. Nó phải được ngâm và khử trùng trong chất khử trùng và loại bỏ khỏi phòng thí nghiệm. Các vật liệu dùng một lần như mẹo đã sử dụng cũng cần được khử trùng. Sau khi ngâm và khử trùng, xử lý thống nhất, chẳng hạn như thiêu hủy, vv; khu vực phân tích sản phẩm khuếch đại có thể sử dụng một số đột biến gen và các chất độc hại, và cần đặc biệt chú ý đến việc bảo vệ an toàn cho nhân viên thí nghiệm.


(5) Hoàn thiện cơ sở vật chất hỗ trợ phòng thí nghiệm

Các phương tiện hỗ trợ phòng thí nghiệm hoàn chỉnh là cần thiết để đảm bảo công việc thí nghiệm. Các thiết bị, dụng cụ tương ứng cần được trang bị theo các nội dung thí nghiệm khác nhau của từng phòng thí nghiệm, chẳng hạn như bàn siêu sạch, máy ly tâm, máy lấy mẫu, v.v.